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PPA制備與使用的基本技術(shù)

• 將初步純化的SPA與HRP用過(guò)碘酸鈉氧化法（交聯(lián)反應時(shí)間在22℃下5h）交聯(lián)。
• 將上述PPA溶液過(guò)Sephadex G-100柱，條件同前。所收集的第1管至第22管的合并液，是PPA存在的主要組分，可用ELISA塑料平板法檢測活性。將合并液濃縮，然后加入30%左右甘油，貯于4℃冰箱備用

     PPA的使用

• PPA-ELISA法。基本上與ELISA法相同，PPA代替了酶標抗抗體。在進(jìn)行微量反應板測定時(shí)，PPA常常加入0.1ml,稀釋度一般在1：2至1：100（應按不同情況試驗）。PPA與IgG是化學(xué)共價(jià)結合，反應時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)，不應超過(guò)2h，控制在30min-60min,反應時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )使PPA吸附到塑料載體上去。
• 用PPA進(jìn)行組織內有關(guān)抗原的定位。甲醛對PPA有顯色影響，因此組織不可用甲醛固定，可用甲醛、乙醇等。PPA對組織內抗原（先與IgG結合）的定位，反應時(shí)間可以延長(cháng)，便于滲透入組織細胞內，且沒(méi)發(fā)現嚴重的物理吸附現象。
• 在PPA實(shí)驗中稀釋液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1緩沖液（2.42gTris溶于蒸餾水后用0.1N HC1調pH至7.4，然后加蒸餾水定容至1000ml,zui后加0.5ml Tween 20）。
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